使用凱氏定氮法測定蜂王漿粗蛋白

     1．原理
    以濃硫酸消化分解蛋白質，其中的氮變成氨，再與硫酸化合生成硫酸銨。生成的硫酸銨與氫氧化鈉反應再生成氨，用蒸餾法使氨蒸出，用標準濃度的硫酸溶液與其反應，剩余的硫酸再經氫氧化鈉標準溶液滴定，從實際消耗的酸量可推算出生成的氨量。
      2．儀器與試劑
      (1)儀器：分析天平(0.000 lg)、50ml凱氏燒瓶、凱氏定氮半微量蒸餾裝置1套、滴定裝置1套。

(2)試劑：
      濃硫酸（分析純，密度1.84）。
      硫酸銅與硫酸鉀混合試劑：稱取5水硫酸銅1g、硫酸鉀10g，置于研缽中混合均勻，研細備用。
      混合指示劑：量取0.1%次甲基紅乙醇溶液2份和0.1%溴甲酚綠乙醇溶液3份，臨用時混合。
      2%硼酸溶液：稱取硼酸2g，量取混合指示劑2ml、乙醇20ml，置于錐形瓶中，加蒸餾水溶解并稀釋至100ml，搖勻備用。
      40%氫氧化鈉溶液：稱取氫氧化鈉40g，加蒸餾水溶解并稀釋至100ml。稀硫酸：量取濃硫酸5.7ml，加蒸餾水稀釋至100ml。
      0.1 mol/L鹽酸標準溶液的配制和標定：
      配制：量取濃鹽酸溶液9ml，加蒸餾水稀釋至1000ml，搖勻備用。
      標定：準確稱取在270 -300℃干燥至恒重的基準無水碳酸鈉約0.15g，置于150ml錐形瓶中，加蒸餾水50ml使其溶解，滴入混合指示劑10滴，用被標定的鹽酸溶液滴定，至溶液由綠色變為紫紅色時，煮沸2min，冷卻至室溫，繼續滴定至溶液由綠色變為暗紫色為終點。
      使用前，用蒸餾水將0.1 mol/L鹽酸溶液準確稀釋10倍，配制成0.01 mol/L的鹽酸溶液。

      3．測定方法
      (1)消化：準確稱取蜂王漿樣品約1g，放入干燥的凱氏燒瓶內，加入2g硫酸銅與硫酸鉀混合試劑，再沿瓶壁緩緩加入61ml濃硫酸，在瓶口放一小漏斗，使燒瓶成45°斜放，在通風櫥內置于電爐上加熱消化（先小火緩緩加熱，使溶液溫度保持在沸點以下，等暴沸停止后，逐步加大火力）。待消化液呈清澈的亮綠色后，再繼續加熱30min，消化即可完畢（消化時間約為lh），冷卻后備用。
      (2)蒸餾：量取2%硼酸溶液10ml置于100ml的錐形瓶中，加入混合指示劑2滴和少量稀硫酸，將冷凝管尖端浸入液面下。然后，將凱氏燒瓶中的消化液經由漏斗移人蒸餾器中，用少量蒸餾水淋洗凱氏燒瓶和玻璃漏斗數次。向蒸餾器中加入40%氫氧化鈉溶液約25ml之后，再加入5ml蒸餾水（一半流入蒸餾器，一半在玻璃杯中作水封）。用調溫電爐加熱開始蒸餾。待錐形瓶內溶液的顏色由酒紅色變為藍綠色時，繼續蒸餾10min，將冷凝管尖端提出液面，使蒸汽繼續沖洗1 min，用少量蒸餾水淋洗尖端，停止蒸餾。
      (3)滴定：用0.01 mol/L的鹽酸溶液滴定錐形瓶中吸收的氨量，滴定至溶液由藍綠色變為灰紫紅色為終點，并作空白試驗校正。
      4．計算

鑒于手工操作比較繁瑣，推薦使用阿爾瓦凱氏定氮儀KN680進行測定，全自動操作，加酸，加堿、蒸餾、滴定、結果計算和打印輸出全自動完成，無需人工干預！

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